- 识别RNA(gRNA )可以通过载体表达或者化学合成后与Cas9蛋白共同进入细胞,对特异DNA 序列剪切,从而促使DNA 发生NHEJ ( nonhomologous end‐joining)导致的基因缺失或同源重组,实现基因敲除。 慢病毒Cas9 表达系统采用慢病毒表达Cas9 或者Cas9Nicknase 蛋白,用于构建稳定表达Cas9蛋白的细胞株。www.inovogen.com/uploads/lenti-Cas9%20Manual.pdf
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一文搞定shRNA实现基因敲低（knockdown）（以pLKO.1质粒为例）
2023年9月11日 · 利用慢病毒构建的shRNA与化学合成siRNA和基于瞬时表达载体构建的shRNA相比。一方面可以扩增瞬时表达的载体使用，另一方面，lentivirus-shRNA克隆经过慢病毒包装 …
CRISPR-Cas9基因编辑技术:原理、方法、敲除的步骤详解
2024年4月17日 · 基因敲除（Knockout）：通过CRISPR-Cas9在目标基因上引入双链断裂（DSB），细胞通过非同源末端连接（NHEJ）修复机制修复断裂，过程中可能引入插入或缺失（indels）突变，导致目标基因功能丧失。
CRISPR/Cas9介导的敲除细胞株构建protocol~ - 知乎专栏
2023年8月14日 · 一、基因敲除原理 Cas9可以对靶基因组进行剪切，形成DNA的 双链断裂 。 在通常情况下，细胞会采用高效的 非同源末端连接 方式（NHEJ）对断裂的DNA进行修复。
什么是慢病毒？慢病毒实验原理是什么？ - 知乎专栏
重组 慢病毒载体 是以hiv-1（人类 免疫缺陷 i 型病毒）为基础发展起来的工具载体，其毒性基因已经被剔除并被外源目的基因所取代，属于假型病毒。 （一次性感染能力而无复制产生新病毒 …
应用慢病毒Cas9 表达系统进行基因敲除的流程： 包装Cas9 过表达慢病毒→筛选Cas9 表达细胞株→转入gRNA 进行基因敲除→筛选基因敲除成功细胞 产品说明书
基因敲除细胞株构建，用质粒、病毒、还是……？ - 知乎
但是， 慢病毒感染 存在着两个比较关键的问题： 1. 利用慢病毒法转染Cas9会在敲除 靶基因 的同时引入新的基因，而且慢病毒转染的 外源基因 是随机整合，存在影响其他 基因表达 的风险。
诱导型慢病毒——Tet-on系统的应用_Tet-Off_调控_Dox - 搜狐
2022年7月12日 · 利用tet-on表达调控载体，包装成工具病毒，最后在实验中即可进行相应的基因操作，可直接感染细胞进行基因的诱导表达；也可注射动物，随后通过DOX的小鼠饲养调控工具 …
CRISPR/Cas9慢病毒：基因编辑的新利器 | 派真生物
基因修饰与敲除： CRISPR/Cas9慢病毒系统可用于实现基因的精确修饰和敲除。通过将目标基因的编辑工具载入慢病毒中，可以在靶细胞中引发目标基因的敲除、插入或修饰等编辑效果。
慢病毒介导的shRNA沉默：构建有效的基因抑制系统 | 派真生物
慢病毒载体是基因治疗和分子生物学研究中常用的工具，特别适合用于传递短发夹RNA (shRNA) 以沉默特定基因的表达。 shRNA通过RNA干扰(RNAi)机制，能够特异性地消减目标mRNA的 …
CRISPR-Cas9应用——基因敲除与敲入系统 - 简书
2019年3月25日 · CRISPR-Cas9基因敲入系统（knock in） 实验原理： CRISPR-Cas9基因敲入系统是Cas9内切酶切割双链DNA，且有一段高度同源的DNA修复模板存在的情况下，生物体内 …